Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩张

从第一次显现出口内自身免疫球蛋白到显现出1改进型冠心病针灸病征的重大突破不下在婴幼儿时期就有不太好的阐述，多个口内自身免疫球蛋白中性的婴幼儿之出处70%在血清转化后10年末患上冠心病，而随访15年的婴幼儿这一人口比例减低到84%。相比之下，占针灸1改进型冠心病一半以上的改进型1改进型冠心病的患病系统还并未得到确实的数据分析。

越来越多的人开始用作分期系统来定义1改进型冠心病的重大突破：个体在显现出多种口内自身免疫球蛋白时离开第1过渡阶段，显现出血压精神状态时离开第2过渡阶段，显现出病征时离开第3过渡阶段。一些多发口内自身免疫球蛋白中性的个体，在1期和2期，重大突破较慢速，并发展为患病的1改进型冠心病。我们之前阐述了一分组在首次验证到多种口内自身免疫球蛋白样本后至少10年无冠心病的想像中慢速重大突破者，这分组高血压人数少，但特性非常完全一致。随后，我们发现口内自身特异性免疫CD8+T线粒体反其所在重大突破平稳速的高血压之中基本不假定，但在近期患病和长期假定的冠心病高血压之中很非常容易验证到。这可能表明，与重大突破高血压相比，这些高血压自身免疫反其所的适度增强。

以前数据分析表明，尽管适度性T线粒体(Treg)数量正常，但冠心病高血压假定一些功能缺陷，其之中包括对IL-2的反其所能力减低。此外，冠心病高血压之中的现象CD4+T线粒体可能对适度不具抵抗性，展示出为现象T线粒体的减缓减弱，自然产生的Treg和体外产生的诱导Treg，以及特异性经历的CD4+T线粒体之中IL-2反其所减弱。本数据分析的目的是阐述了CD4+适度性T线粒体(Treg)在一小群想像中平稳速重大突破者之中的特性，他们的年长为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX数据分析是一项以青年人为基础的纵向数据分析，在21岁一般而言肺癌的高血压亲属之中检查1改进型冠心病的危险因素。我们之前阐述了长期平稳速重大突破者的特性，他们保有多重口内自身免疫球蛋白中性大约10年，但并未显现出冠心病的针灸病征，慢速性或非顺利完成性自身免疫。随后，10名继续保有无冠心病并愿意提供大量血液样本的平稳速重大突破者纳入T和B线粒体功能数据分析。在目前的数据分析之中，8名慢速重大突破者(SP分组)，之中位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的口内自身免疫球蛋白中性。所有的参与者都受制于1改进型冠心病重大突破的1期，尽管一些人随后失去了口内自身免疫球蛋白对某些特异性的中性反其所，然而，一名高血压已经受制于2期至少6年，但并未显现出针灸病征，一名高血压被诊断为冠心病，该受试者72岁，在野外实验样本时，其HbA1c上升时到53 mmol/mol(7%)，在数据分析之中对该小分子顺利完成了单独数据分析。分立外周血单个核线粒体(PBMCs)，采用多参数流式线粒体妖术和T线粒体减缓试验数据分析小分子之中Treg的频带、表改进型和功能。用作FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、举例来说和回归)顺利完成无委派聚类数据分析，数据分析Treg表改进型。

结果：与健康小分子相比，来自慢速重大突破体的思绪CD4+T线粒体的委派聚类说明了，诱导的思绪CD4+ Treg频带减低，与糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白(GITR)表述减低有关。一名HbA1c上升时的高血压与重大突破平稳速者和最简单的比对分组相比，Treg曲谱有所不同。功能数据分析表明，与健康小分子相比，来自平稳速重大突破体的Treg介导的CD4+现象T线粒体减缓明显受损。展示出为对现象CD4+T线粒体CD25和CD134表述的减缓减低。

布1 深入的表改进型数据分析说明了，CD4+Treg亚改进型在慢速重大突破路由表之中减低。由FlowSOM分解的Treg一楼，聚集在来自所有小分子的活CD4+CD45RA -线粒体上。根据上面物表述鉴定出10个元簇:思绪T线粒体_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;思绪T cell_4;CD49b思绪T线粒体;HLA-DR + GITR +思绪T线粒体;寄存器Treg_1;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;和寄存器Treg_4。(a)用作9个不同Treg上面分解的10个元簇的MST。每个节点值得一提的是一个空降兵(100个空降兵)，更为大的元空降兵(10个元空降兵)在节点分组周围着色。每个节点之中的甜品布声称单个上面的表述高级别。(b)每个元聚类的热布，以说明了整体上面表述。(c, d)为HD分组(c)和SP分组(d)分解布，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对原子量为每个metacluster盒线布(原子量> 0.05%)已确定为HD和SP分组:寄存器Treg_2 (e),寄存器Treg_3 (f),寄存器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +思绪T线粒体(h)、思绪T cell_1(i),思绪T cell_2 (j),思绪T cell_3 (k) n d CD49b思绪T线粒体(l)。橘色红色值得一提的是**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于布形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

布2 用作CITRUS的预测模改进型证实，Treg频带的减低是重大突破平稳速的图案。分级制度奈斯(a - f)和柑橘数据分析(g-k)相对SP参与者和最简单的HD参与者在CD4+CD45RA−T线粒体上的差异性。(a)特异性CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的值得一提的是性布。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表述顺利完成分立，模拟FlowSOM群体。(b) HD(黑点)和SP(斑点)分组以及小分子SP 606(橘色)之中CD25+ cd127的频带统计布。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+奈斯子集的盒线布;(c) HLA-DRloGITR−(寄存器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(寄存器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(寄存器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+寄存器T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表述强度着色，上标突出的簇被识别为SP和HD路由表之间的不同。(j)盒线布说明了了在SP(斑点)和HD(灰点)分组之中，CITRUS思绪Treg_3和Treg_4的相对原子量(人口比例)。(k)控制点说明了每个簇的表改进型(粉红色)和Treg上面相对表述与历史背景表述(黄色);上列，寄存器Treg_3;下面一行，寄存器Treg_4。历史背景与所有其他簇之中上面的表述有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

布3 与健康献血者相比，重大突破平稳速者思绪treg的GITR减低。每个思绪CD4+T线粒体元簇(思绪T线粒体_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;CD49b +思绪T线粒体;HLA-DR + GITR +思绪T线粒体;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)验证每个表述上面的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)路由表的表述热布(sp606不包括在内)。(c,d)思绪Treg_4元簇之中所有HD(黑色)、所有SP(黄色)和SP 606(橘色)的FlowSOM GITR表述串联，说明了控制点(c)和统计布(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(橘色)所有小分子包括，p< 0.05(黄色)小分子SP 606和最简单的HD不包括在测试之中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之中GITR表述，从分级制度奈斯，从所有HD(黑色)、所有SP(黄色)和SP 606(橘色)串联，说明了控制点(e)和统计布(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

布4 来自平稳速重大突破的CD4+ treg线粒体控制现象CD4+T线粒体的能力减低。SP分组用黄色的线和红色声称，HD分组用黑色的线和红色声称，橘色的线/红色声称小分子sp606。用作CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T线粒体顺利完成分选。CD4+CD25−(其所答者)被上面为CFSE, Treg按推论的人口比例硫酸铜。用抗CD3 /28微珠转化线粒体，培植3天后顺利完成流式线粒体妖术验证。(a-d)与CD4+其所答者相对其所的treg培植(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD其所答者培植。(a,b,f) CFSE增生(a,e)和CFSE减缓倍数(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的减缓倍数。用作中性比对(诱导的响其所线粒体不含treg)计算减缓倍数。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相对测试

布5 现象CD4+T线粒体对平稳速重大突破的T线粒体转化的减缓更为引人注意。SP分组用黄色的线和红色声称，HD分组用黑色的线和红色声称，橘色的线/红色声称小分子sp606。用作CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T线粒体顺利完成分选。CD4+CD25−(其所答者)被cfsel上面，treg按推论的人口比例硫酸铜。用抗CD3 /28微珠转化线粒体，培植3天后顺利完成流式线粒体妖术(CD25反染)和线粒体因子数据分析。HD Treg与HD、SP或sp606其所答者共同培植。(a,b) CFSE增生(a)和CFSE减缓三份(b)。(c,d) CD25减缓三份(c)和CD134减缓三份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培植之中的表述。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相对测试

事实：我们得出结论的事实是，来自平稳速重大突破子的转化思绪CD4+Treg在GITR表述之中得到了扩展到和丰富，强调了进一步数据分析Treg在1改进型冠心病高风险个体之中的值得注意的必要性。

注解出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28