Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型号糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次注意到肾脏自身HIV到注意到1HG冠心病临床研究工作患者的实质性率在学童时期就有很好的阐述，多个肾脏自身HIVHIV的学童中都有70%在肾脏素转换后10将近肺结氘冠心病，而随访15年的学童这一人口比例减少到84%。比起之下，占有临床研究工作1HG冠心病一半以上的HG1HG冠心病的复发有助于还很难受益必要的研究工作。

更为多的人开始可用分期该系统来定义1HG冠心病的实质性：有机体在注意到多种肾脏自身HIV时转回第1下一阶段，注意到血糖异常时转回第2下一阶段，注意到患者时转回第3下一阶段。一些多发肾脏自身HIVHIV的有机体，在1期和2期，实质性较慢，并转变为复发的1HG冠心病。我们之前阐述了一四组在首次探测到多种肾脏自身HIV比对后至较少10年无冠心病的极慢实质性者，这四组病症人数较少，但特征非常指明。随后，我们注意到肾脏自身上皮细胞特异性CD8+T肝细胞反应以在实质性平稳的病症中都基本不依赖于，但在近期复发和长期依赖于的冠心病病症中都很更易探测到。这确实算出结论，与实质性病症比起，这些病症自身免疫反应以的可调减弱。

早期研究工作算出结论，尽管可调性T肝细胞(Treg)数量正常，但冠心病病症依赖于一些功用缺陷，其中都包含对IL-2的反应以能力也降低。此外，冠心病病症中都的现象以CD4+T肝细胞确实对可调更具抵抗性，表现为现象以T肝细胞的消除减弱，自然产生的Treg和人体内产生的抑制Treg，以及上皮细胞境况的CD4+T肝细胞中都IL-2反应以减弱。本研究工作的目的是阐述了CD4+可调性T肝细胞(Treg)在一小群极平稳实质性者中都的特征，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间段为18-32年。

方法有：BOX研究工作是一项以年轻人为基础的纵向研究工作，在21岁以下复发的病症亲属中都健康检查1HG冠心病的凶险因素。我们之前阐述了长期平稳实质性者的特征，他们保持多重肾脏自身HIVHIV最少10年，但很难注意到冠心病的临床研究工作患者，慢性或非同步进行性自身免疫。随后，10名继续保持无冠心病并希望发放大量血液比对的平稳实质性者归属于T和B肝细胞功用分析。在目前的研究工作中都，8名慢实质性者(SP四组)，中都位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁彼此间的肾脏自身HIVHIV。所有的旁观者都东南面1HG冠心病实质性的1期，尽管一些人随后失去了肾脏自身HIV对某些上皮细胞的HIV反应以，然而，一名病症已经东南面2期至较少6年，但很难注意到临床研究工作患者，一名病症被诊断为冠心病，该物理者72岁，在搜集物理比对时，其HbA1c增高到53 mmol/mol(7%)，在数据分析中都对该遗传物质同步进行了单独审计。分离外周血单个氘肝细胞(PBMCs)，使用多参数流式肝细胞术和T肝细胞消除测试审计遗传物质中都Treg的高频率、遗传和功用。可用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)同步进行无指导聚类分析，审计Treg遗传。

结果：与身心健康遗传物质比起，来自慢实质性体的思绪CD4+T肝细胞的指导聚类算出结论，激活的思绪CD4+ Treg高频率减少，与利尿剂抑制的TNFR特别肽(GITR)传达减少有关。一名HbA1c增高的病症与实质性平稳者和匹配的对照四组比起，Treg谱大同小异。功用分析算出结论，与身心健康遗传物质比起，来自平稳实质性体的Treg介导的CD4+现象以T肝细胞消除显著损害。表现为对现象以CD4+T肝细胞CD25和CD134传达的消除减少。

平面图1 深入的遗传分析算出结论，CD4+Treg亚HG在慢实质性队列中都减少。由FlowSOM生成的Treg室，聚集在来自所有遗传物质的活CD4+CD45RA -肝细胞上。根据上面物传达鉴定出10个元簇:思绪T肝细胞_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;思绪T cell_4;CD49b思绪T肝细胞;HLA-DR + GITR +思绪T肝细胞;CPUTreg_1;CPUTreg_2;CPUTreg_3;和CPUTreg_4。(a)可用9个完全相同Treg上面生成的10个元簇的MST。每个路由器推选一个空降兵(100个空降兵)，巨大的元空降兵(10个元空降兵)在路由器四组周围绘图。每个路由器中都的饼平面图对此单个上面的传达级别。(b)每个元聚类的热平面图，以算出结论整体上面传达。(c, d)为HD四组(c)和SP四组(d)生成平面图，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对来说丰度为每个metacluster箱子中央线平面图(丰度> 0.05%)确定为HD和SP四组:CPUTreg_2 (e),CPUTreg_3 (f),CPUTreg_4 (g), HLA-DR + GITR +思绪T肝细胞(h)、思绪T cell_1(i),思绪T cell_2 (j),思绪T cell_3 (k) n d CD49b思绪T肝细胞(l)。黄色边框推选**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon以此类推符号秩检验。此键适用于平面图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

平面图2 可用CITRUS的预测模HG证明，Treg高频率的减少是实质性平稳的图案。这两项介导(a - f)和水果分析(g-k)较为SP旁观者和匹配的HD旁观者在CD4+CD45RA−T肝细胞上的差异。(a)互补CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的推选性平面图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3掺入，然后通过HLA-DR和GITR传达同步进行分离，模拟FlowSOM群体。(b) HD(黑点)和SP(虎纹)四组以及遗传物质SP 606(黄色)中都CD25+ cd127的高频率概述平面图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+介导子集的箱子中央线平面图;(c) HLA-DRloGITR−(CPUTreg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(CPUTreg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(CPUTreg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+CPUT cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3传达强度着色，斜中央线突出的簇被识别为SP和HD队列彼此间的完全相同。(j)箱子中央线平面图算出结论了在SP(虎纹)和HD(灰点)四组中都，CITRUS思绪Treg_3和Treg_4的相对来说丰度(人口比例)。(k)直方平面图算出结论每个簇的遗传(粉红色)和Treg上面相对来说传达与背景传达(蓝色);上列，CPUTreg_3;下面动身，CPUTreg_4。背景与所有其他簇中都上面的传达有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon以此类推符号秩检验

平面图3 与身心健康献血者比起，实质性平稳者思绪treg的GITR减少。每个思绪CD4+T肝细胞元簇(思绪T肝细胞_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;CD49b +思绪T肝细胞;HLA-DR + GITR +思绪T肝细胞;CPUTreg_2;CPUTreg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)探测每个传达上面的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的传达热平面图(sp606不包含在内)。(c,d)思绪Treg_4元簇中都所有HD(蓝灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(黄色)的FlowSOM GITR传达串联，算出结论直方平面图(c)和概述平面图(d)。Wilcoxon以此类推符号秩和检验，p< 0.07(黄色)所有遗传物质包含，p< 0.05(蓝色)遗传物质SP 606和匹配的HD不包含在测试中都。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中都GITR传达，从这两项介导，从所有HD(蓝灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(黄色)串联，算出结论直方平面图(e)和概述平面图(f) *p< 0.05, Wilcoxon以此类推符号秩检验

平面图4 来自平稳实质性的CD4+ treg肝细胞控制现象以CD4+T肝细胞的能力也降低。SP四组用蓝色的中央线和边框对此，HD四组用紫色的中央线和边框对此，黄色的中央线/边框对此遗传物质sp606。可用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞同步进行分选。CD4+CD25−(这样的话者)被上面为CFSE, Treg按推论的人口比例溶液。用抗CD3 /28微珠活化肝细胞，培训3天后同步进行流式肝细胞术探测。(a-d)与CD4+这样的话者相对来说应以的treg培训(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD这样的话者培训。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE消除倍数(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的消除倍数。可用HIV对照(激活的响应以肝细胞不含treg)计算消除倍数。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重较为测试

平面图5 现象以CD4+T肝细胞对平稳实质性的T肝细胞活化的消除更敏感。SP四组用蓝色的中央线和边框对此，HD四组用紫色的中央线和边框对此，黄色的中央线/边框对此遗传物质sp606。可用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞同步进行分选。CD4+CD25−(这样的话者)被cfsel上面，treg按推论的人口比例溶液。用抗CD3 /28微珠活化肝细胞，培训3天后同步进行流式肝细胞术(CD25反染)和肝细胞因子分析。HD Treg与HD、SP或sp606这样的话者携手培训。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE消除百分率(b)。(c,d) CD25消除百分率(c)和CD134消除百分率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培训中都的传达。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重较为测试

假设：我们算出的假设是，来自平稳实质性子的活化思绪CD4+Treg在GITR传达中都受益了扩展和丰富，忽略了进一步研究工作Treg在1HG冠心病效用有机体中都的表HG的必要性。

原文注解：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28